甜菜树贝壳杉烯合酶基因的克隆与原核表达
作 者：刘洪伟， 王帅， 王强， 王伟， 杨艳芳， 刘锡葵*， 邱德有
期刊名称：食品与生物技术学报
影响因子：
卷 期 号：36（5）
页 码：479-485
关键词：甜菜树；贝壳杉烯合酶；原核表达；气质联用
论文摘要：
本文作者研究了赤霉素合成途径中的关键酶-贝壳杉烯合酶， 对其功能的研究可以为以后优化品种提供基因层面的基础。 首先通过 RACE-PCR 技术，从甜菜树叶片中克隆得到贝壳杉烯合酶基因（Ent-kaurene synthase gene，YlKS）的全长 cDNA，共 2 512 bp（GenBank 登录号为KP872698），其 ORF 长度为 2 232 bp，共编码 743 个氨基酸，预测蛋白质相对分子质量大小为84 987，蛋白质等电点为 5.264，表明该蛋白质呈酸性。 将该基因构建到表达载体 pET32a 中，得到重组质粒 pET-32a-YlKS。 通过将 pGG/An2、pIRS 和重组质粒 pET-32a-YlKS 3 个质粒共转入菌株 BL21（DE3）中，得到重组菌株，并进行发酵。 通过 SDS-PAGE 分析发现，重组蛋白成功得到了表达。 最后通过对发酵产物进行萃取，并使用 GC-MS 进行检测，确定了该基因所编码的酶确
实是贝壳杉烯合酶。