中国红豆杉TcAPLs基因的克隆与表达分析
作 者：李艳艳，杨艳芳，刘洪伟，王帅，邱德有
期刊名称：中草药
影响因子：1.000
卷 期 号：46(10)
页 码：1512-1519
关键词：中国红豆杉； ＡＰＬ 基因； 基因克隆； 生物信息学分析； 表达
论文摘要：
克隆中国红豆杉ａ ｌｔ ｅｒｅｄ ｐ ｈｌ ｏｅｍｄ ｅｖｅｌｏｐｍ ｅｎｔ （ ＡＰＬ ） 基因， 研究ＡＰＬ 在中国红豆杉剥皮后树皮再生过程中的表达状况， 以揭示其可能的调控作用机制。方法利用反转录ＰＣ Ｒ（ ＲＴ－ＰＣＲ） 方法克隆得到3 个中国红豆杉ＡＰＬ（ ＴｃＡＰＬ ｓ ） 基因的ｃ ＤＮＡ 全长序列， 分别命名为ＴｃＡＰＬ ｌ 、ＴｃＡＰＬ 2 和ＴｃＡＰＬ 3 ， 进一步利用生物信息学工具对其进行分析， 最后利用半定量ＲＴ－ＰＣＲ对中国红豆杉不同组织ｑＲＴ－ＰＣ Ｒ 技术对其剥皮再生不同时期旳ＴｃＡＰ Ｌｓ 进行表达分析。结果系统进化树结果显示， ＴｃＡＰＬ ｌ和ＴｃＡＰＬ 2 编码的蛋白与川桑的ＡＰＬ 蛋白亲缘关系最近， 聚为一类； ＴＣＡＰＬ 3 处在ＡＰＬ 另一个大的独立分支上。组织表达谱分析表明ＴｃＡＰＬ ｌ 和ＴｃＡＰＬ2 2 个基因主要在根、茎、叶片和韧皮部（ 含形成层） 中均高表达； ＴｃＡＰＬ 3 在叶片中表达量较高， 而在根和木质部（含形成层） 表达较低。在中国红豆杉剥皮再生过程中， ＴｃＡＰＬ ｌ 和ＴｃＡＰＬ 2 2 个基因的表达水平随着时间的延长表现为先上升后下降的趋势， 均在3 6 ｄ 下降最明显； ＴＣＡＰＬ 3 的表达则在整个组织再生过程中被抑制。结论克隆了 3 个ＴｃＡＰＬ ｓ 基因，3 个基因在中国红豆杉剥皮再生过程中均有响应， 推测它们在中国红豆杉植物剥皮后组织再生中起一定的调控作用。